Desarrollo de nuevos procedimientos rápidos y eficaces para evaluar in situ la sensibilidad o resistencia bacteriana a distintos tipos de antibióticos

Resumen

La resistencia antibiótica es un grave problema de salud pública mundial. Los antibiogramas clásicos habitualmente requieren 18-24 horas, pero en situaciones críticas puede ser decisiva una caracterización rápida y precisa de la cepa bacteriana.Esta tesis desarrolla procedimientos para determinar la sensibilidad/resistencia antibiótica en bacterias de alta patogenicidad, de forma simple, rápida y eficaz. Todos tienen en común la inmovilización de las bacterias en un microgel para su observación bajo microscopía de fluorescencia.Para cada tipo de antibiótico se estableció y validó un parámetro fenotípico que permite discriminar cepas resistentes de sensibles. Las quinolonas, que inducen roturas del ADN, fueron evaluadas mediante visualización directa de la fragmentación del nucleoide. En el caso de antibióticos que inhiben la síntesis del peptidoglicano, la afectación de la pared bacteriana se determinó mediante la promoción de la liberación del nucleoide o de la elongación celular. La colistina, que actúa sobre la membrana plasmática, mostró afectación secundaria en ADN y pared celular. Los antibióticos que inhiben la síntesis proteica, se evaluaron por prevención de procesos autolíticos inducidos en Gram-positivos y de la elongación por respuesta SOS provocada por mitomicina C en Gram-negativos.Los resultados se obtuvieron entre 40-210 minutos, concordando prácticamente con los antibiogramas estándar.