Nuevas estrategias de separación basadas en el uso de la extracción en fáse sólida y LC/MS para el análisis, aislamiento e identificación de compuestos bioactivos

Resumo

En el presente trabajo nos planteamos desarrollar nuevas estrategias analíticas para el análisis, identificación, purificación y caracterización de compuestos bioactivos con un amplio grado de aplicación en química orgánica y química de productos naturales. En el primer capítulo de esta memoria presentamos el proceso tradicional para el aislamiento, purificación y caracterización de nuevos metabolitos secundarios de los corales blandos: Pachyclavularia violácea y Xenia sp. En el capítulo 2 abordamos la exploración y desarrollo de nuevas metodologías analíticas basadas en cromatografía de líquidos y espectrometría de masas (HPLC/MS) para el análisis automático de muestras. En este tema se muestra el desarrollo y aplicación de un sistema ortogonal de HPLC/DAD/MS/MS con selector automático de columnas que nos permite llevar a cabo el desarrollo de métodos de hasta 72 diferentes condiciones de separación por muestra de manera automática. En el capítulo 3 se abordan las ventajas de nuevas resinas basadas en rellenos poliméricos para extracción en fase sólida y su aplicación en la purificación de compuestos de síntesis. En el capítulo 4 se realiza un amplio estudio de las nuevas columnas de base sílice Chromolith®, basadas en la tecnología monolítica, y se muestran como una alternativa a las columnas convencionales de partículas para acelerar los procesos de HPLC analítico y preparativo. En el capítulo 5 se muestran ejemplos de la aplicación de las nuevas metodologías analíticas discutidas en los capítulos 2-4 y su contribución en el área de los productos naturales. En primer lugar, se demuestra la potencial aplicación del sistema ortogonal de HPLC/DAD/MS/MS en la búsqueda de las mejores condiciones de HPLC para el análisis y purificación final del metabolito vancrobactina de la bacteria patógena de peces Vibrio anguillarum (serotipo O2). En segundo lugar presentamos una nueva estrategia, basada en la combinación de EFS y HPLC/MS para el aislamiento y purificación del sideróforo vancrobactina en fracción de horas. Esta nueva metodología se validó con el aislamiento y purificación por primera vez de vancrobactina de Vibrio anguillarum (serotipo O3)