Asimilación de maltosa en lluyveromyces lactis. Aplicaciones biotecnológicas

Resumen

La fermentación de maltosa en la levadura Saccharomyces cerevisiae requiere uno de los cinco loci MAL. Cada locus está formado por tres genes, un gen regulador y dos estructurales que codifican la maltosa permeasa, proteína que transporta la maltosa al interior celular y la matasa, enzima que hidroliza la maltosa en dos unidades de glucosa. Estos dos genes, región UAS mal, en presencia de maltosa. En la levadura Kluyveromyces lactis, cepa 2359/I52F, hemos encontrado dos loci MAL, el locus MAL2 localiza en el cromosoma II y el MALS en el IV y/o V, es posible que existan otros loci. El locus MAL2 conviene los genes estructurales KlMAL2I y KlMAL22, el MAL5 los genes KlMAL51 y KlMAL52. KlMAL2I y KlMAL5I codifican maltosas permeasas, los genes KlMAL22 y KlMAK52 maltasas. Los genes estructurales comparten un promotor bidireccional de diferentes tamaño, Io67 pb (locus MAL2) vs I24 pb (MAL5). El análisis de la expresión de estos genes demuestra que es un sistema fuertemente reprimido en presencia de glucosa e inducido con maltosa. El análisis de la secuencia aminoacídica del locus MAL5 avala su no funcionalidad sin embargo hemos detectado transcrito de ambos, posiblemente codifican proteínas trucadas. El gen regulador no está localizado adyacente a los genes KlMAL2I y KlMAL5I como sucede en S.cerevisiae, la organización de los loci MAL en K.lactis es diferente. El promotor bidireccional KlMAL2I-MAL22 es apto para la expresión de proteínas heterologas. Hemos producido dos alérgenos recombinantes Alta IP del hongo Alternaria alternata y Ole eIp del árbol Olea europea, importantes para un futuro desarrollo de vacunas recombinantes. Ensayos con suero de pacientes demuestran que la proteína Alt aIp producida por K.lactis es válida para el diagnóstico de alergia a A.alternata.