Clonaje, caracterizacion y regulacion transcripcional y postranscripcional del gen del transportador de nitrato ynt1 de la levadura hansenula polymorpha

Abstract

La secuenciación del fago JA13 aislado de una genoteca genómica de H. polymorpha en el fago EMBL3 y que contiene los genes que codifican la nitrato reductasa (YNR1) y la nitrato reductasa (YNI1), reveló la presencia de una pauta abierta de lectura de 1524 pb que presenta gran homología con los genes de los transportadores de nitrato de Aspergillus nidulans (crnA) y Chlamydomonas reinhardtii (Nrt1;1). Esta pauta abierta de lectura se denominó YNT1 (gen del transportador de nitrato de H. polymorpha. La interrupción de este gen resulta en una disminución importante en la tasa de toma de nitrato. La secuencia aminoacídica deducida de YNT1 presenta una gran similitud con las correspondientes deducidas de los genes aislados en el hongo A, nidulans, el alga C. reinhardtii y las plantas H. vulgare y N. plumbaginifolia. Esta similitud es más patente en el extremo amino terminal. La expresión del gen del transportador de nitrato es estrictamente dependiente de la presencia de nitrato en el medio. Las secuencias promotoras implicadas en esta expresión se encuentran localizadas en una amplia zona. Se ha obtenido un antisuero anti-Ynt1p usando como antígeno la zona central hidrofílica de la proteína. El antisuero reconoce la proteína Ynt1p en fracciones de membranas totales de células silvestres para el gen YNT1 inducidas con nitrato.