Estudios estructurales de la arginasa de hígado de rata y caracterización inicial del centro activo

Resumen

EN EL PRESENTE TRABAJO HEMOS DESARROLLADO UN NUEVO METODO PARA LA PURIFICACION DE LA ARGINASA DE HIGADO DE RATA, CUYA ETAPA CENTRAL SE BASA EN UNA CROMATOGRAFIA DE INMUNOAFINIDAD, OBTENIENDOSE ASI UNA PREPARACION ENZIMATICA CON UN ALTO GRADO DE PUREZA. HEMOS DEMOSTRADO QUE EXISTE UNA GRAN HOMOLOGIA ENTRE LAS DOS SUBUNIDADES QUE CONSTITUYEN LA ENZIMA, SIENDO POSIBLE QUE LA DE MENOR PESO MOLECULAR TENGA SU ORIGEN EN UNA MODIFICACION POSTRANSCRIPCIONAL O POSTRADUCCIONAL, MEDIANTE LA CUAL SE PRODUZCA UNA DELECCION DEL EXTREMO CARBOXILO TERMINAL DE LA PROTEINA. A SU VEZ HEMOS CONSEGUIDO AISLAR EN FORMA ACTIVA UNA ENZIMA COMPUESTA EXCLUSIVAMENTE POR LA SUBUNIDAD DE MENOR PESO MOLECULAR. POR OTRA PARTE HEMOS LLEVADO A CABO MODIFICACIONES QUIMICAS SELECTIVAS DE ALGUNOS AMINOACIDOS, LO QUE NOS PERMITE DESCARTAR QUE LOS RESIDUOS DE LISINA NO PARTICIPAN DIRECTAMENTE EN EL MECANISMO DE UNION DEL SUSTRATO ARGININA A LA ARGINASA DE HIGADO DE RATA. SIN EMBARGO SE DEMUESTRA QUE LA SERINA ES UN RESIDUO FUNDAMENTAL EN DICHO MECANISMO. FINALMENTE MEDIANTE DIGESTION EXHAUSTIVA DE LA ARGINASA CON PAPAINA Y PROTEASA V8 DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS SE DEMUESTRA LA EXISTENCIA DE UN ORDENAMIENTO ESTRUCTURAL QUE SE MANTIENE A PESAR DE LOS NUMEROSOS PUNTOS DE CORTE QUE EXPERIMENTAN LAS CADENAS POLIPEPTIDICAS DE ESTA ENZIMA, PRESENTANDO ASI UNA CONFORMACION ALTAMENTE ACTIVA.