Estudio de los dominios del factor Von Willebrand para su unión a los receptores plaquetaressu patología y anomalías genéticas

Resumen

La enfermedad de don Willebrand (EVW) es un desorden hemorrágico hereditario genética y clínicamente heterogéneo, cuasado por una deficiencia o disfunción del FVW. Es la enfermedad hemorrágica hereditaria más común en la actualidad. Se clasifica en los tipos 1, 2, y 3. A su vez, el tipo 2 se divide en cuatro subtipos: 2A, 2B, 2M y 2N. El diagnóstico de la EVW continúa siendo un problema clínico en muchos casos debido a la ausencia de síntomas específicos, a la gran variedad fenotípica entre los pacientes, y a la baja sensibilidad de algunos métodos que supone muchas veces la realización de numerosas pruebas analíticas. La identificación de los defectos genéticos podría contribuir a un mejor diangóstico y clasificación de esta enfermedad, por lo que los principales objetivos de esta tesis están dirigidos al estudio genético de la molécula del FVW en formas tipo 2 de EVW. Se llevó a cabo el análisis genético de los exones 28 y 44 correspondientes a los módulos del FVW que interaccionan con los receptores plaquetares GP Ib-IX y GP Iib/IIIa respectivamente. Hasta la fecha no se ha encontrado ningún paciente con alguna alteración de este último módulo. La búsqueda demutaciones en el modulo de unión a la GPIb-IX plaquetar, permitió la identificación de los defectos moleculares responsables de la enfermedad o de las mutaciones candidatas en casi todas las familias estudiadas demostrando la implicación del gen del FVW. Los cambios C1272X e I1568N son mutaciones candidatas de la EVW tipo 2A. La detección de estas mutaciones que dan lugar a una pérdida de la función del FVW, reafirman la importancia del dominio A1 de la molécula en la función fisiológica de esta proteína. Además, los estudios genéticos han ayudado a la diferenciación de variantes tipo 2M de EVW enmascaradas por formas tipo 1, contribuyendo a un mejor diagnóstico y clasificación de los pacientes, así como la elección de un tratamiento adecuado y consejo genético. Por otro lado la presencia de un defecto congénito del FVW conduciendo a una unión anormal a la GPIIb-IIIa plaquetar, no puedo ser confirmada. Sin embargo, su existencia parece probable si tenemos en cuenta la extrema heterogeneidad de esta enfermedad, por lo que decidimos continuar con el estudio. Reproducimos la molécula mutante RGES mediante la técnica de Overlap extensión-PCR y desarrollamos un método alternativo, rápido, sensible, y sencillo, de detección de mutaciones mediante hibridación de sondas fluorescentes en el equipo "LightCycler", que nos permitirá seguir con la investigación en esta región. Este ensayo, demostró ser de utilidad para la detección de posibles formas variantes de EVW con una alteración en el módulo de unión a la GPIIb/IIIa plaquetar.